用作叶酸拮抗剂（如甲氨蝶呤、乙胺嘧啶或甲氧苄啶等）的解毒剂。 

用于防治甲氨蝶呤过量或大剂量治疗后所引起的严重毒性作用。 

也可用于叶酸缺乏所引起的巨幼细胞性贫血的治疗。 

与5-氟尿嘧啶合用，用于治疗晚期结肠、直肠癌。

缓慢静脉注射200mg/m²本品(不少于3分钟)后，接着用370mg/m²5-氟尿嘧啶静注。

静脉注射20mg/m²本品后，接着用425mg/m²5-氟尿嘧啶静注。每日一次，连续5日为一疗程，间隔4-5周可重复一次。注意观察毒性反应的恢复情况,并根据病人的耐受性调整5-氟尿嘧啶的剂量以延长存活期。

叶酸缺乏引起的巨幼细胞性贫血：一般每天肌注1mg，尚无根据证明剂量增加疗效会增加。

与氟尿嘧啶联用，用于晚期结、直肠癌（目前临床上有多种给药方案和剂量，以下推荐两种联合用药方案）：

甲氨蝶呤的过量补救：

叶酸拮抗剂（如甲氨蝶呤﹑乙胺嘧啶或甲氧苄啶等）治疗后亚叶酸钠“解救”疗法： 
根据甲氨蝶呤的血药浓度决定亚叶酸钠的剂量。一般静脉注射甲氨蝶呤24小时后，采用本品剂量按体表面积9～15mg/m²，每6～8小时1次，持续2日，直至血中甲氨蝶呤浓度在5×10^－8mol/L以下。作为乙胺嘧啶或甲氧苄啶等的解毒剂，每次肌注剂量9～15mg，视中毒情况而定。

治疗前观察肌酐廓清试验；

甲氨蝶呤大剂量用药后12～24小时测定血浆或血清甲氨蝶呤浓度，以调整本品剂量和应用时间；当甲氨蝶呤浓度低于5×10^－8mol/L时，可以停止实验室监测；

甲氨蝶呤治疗前及以后每24小时测定血清肌酐量，用药后24小时肌酐量大于治疗前50%，指示有严重肾毒性，要慎重处理；

甲氨蝶呤用药前及用药后每6小时应监测尿液酸碱度，要求尿液pH值在7以上，必要时用碳酸氢钠和水化治疗，在注射当天及注射后2日（每日补液量在3000ml/m²）；

本品与甲氨蝶呤不宜同时使用，以免影响后者抗叶酸作用，一次大剂量甲氨蝶呤后24～48小时再启用本品，剂量应要求血清浓度等于或大于甲氨蝶呤浓度。

初次使用本品，应在有经验的医师指导下用药，并严格按照规定的剂量及用药时间执行。

当患者有下列情况者，本品应慎用于甲氨蝶呤的“解救”治疗：酸性尿（pH<7）、腹水、失水、胃肠道梗阻、胸腔渗液或肾功能障碍。有上述情况时，甲氨蝶呤毒性较显著，且不易从体内排出，病情急需者，本品剂量可能要加大。

接受大剂量甲氨蝶呤而用本品“解救”者应进行下列各种实验室监测：

临床使用本品应用现配液，避免光线直接照射及热接触。